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2018-01-17   来源:医药论文

  大黄素标准品在紫外分光光度计扫描下,最大吸收波长为225、285、435 nm,在选定的流动相下,其中波长为285 nm时,大黄素的峰最高,附近没有杂质峰,基线平稳。故选定285 nm为检测波长。本试验首次采用HPLC法对广西产道地药材红穿破石的主成分大黄素进行含量测定。大黄素具有抗炎、抑菌、利尿、利胆等药理作用,这进一步证实民间常用于尿路感染、急慢性肾炎、肾结石的治疗是有一定道理的。本试验仅考察广西等10个地区的红穿破石,且不同产地的红穿破石的大黄素含量差异较大,桂林产的红穿破石的大黄素含量最高,同一株植物根的含量最大,约为茎的2倍。这些差异可能是由药材的产地、生长环境、采收期不同等原因造成。

  1 仪器与试药

  美国Agilent1100系列高效液相色谱仪(包括四元泵,自动进样器,脱气机,紫外可见检测器,柱温箱和Agilent1100化学工作站),BUG40型超声波清洗器。

  大黄素对照品(批号110756-200110,含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供,纯度在98%以上;红穿破石由广西玉林制药有限责任公司提供,来源于广西各地,经广西玉林制药有限责任公司中药鉴定室专家鉴定。水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

  2 方法与结果

  2.1 色谱条件

  Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(75∶25);流速:1.0 mL/min;检测波长:285 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。理论板数按大黄素计算应不低于3 000。在此色谱条件下,红穿破石样品能够达到基线分离(见图1)。

  2.2 对照品溶液的制备

  精密称取大黄素对照品适量,加甲醇制成每1 mL含大黄素6.3 μg的溶液,作为对照品溶液。 取红穿破石粉末适量,取0.4 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,称定重量,超声30 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。

  2.3 线性关系的考察

  分别精密吸取大黄素对照品溶液(6.3 μg/mL)1、2、4、6、8、10 mL,置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样10 μL,连续进样2次,测定峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=4 172.28A+0.46,r=0.999 9,结果表明,大黄素在0.006 3~0.063 μg范围内呈良好的线性关系。

  2.4 试验

  取大黄素对照品溶液,各重复进样6次,测定峰面积,结果大黄素峰面积值为265.8、268.5、265.8、268.3、267.9、267.7,RSD=0.4%。表明具有较好的精密度。取同一批的样品6份,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,测定大黄素峰面积,结果为222.2、223.9、222.0、225.2、223.7、222.6,RSD=0.5%。表明该法重现性良好。取同一供试品溶液,分别于配制后0、4、8、12 h,依法测定峰面积,结果RSD=0.25%,表明样品溶液在12 h内基本稳定。

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